高灵敏度 GelRed和GelGreen是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料 稳定性极好 可以使用微波炉加热,可以在室温下保存 更安全 艾姆斯氏试验结果表明,该染料的诱变性远小于 溴化乙锭 (EB) 广泛的适应性 适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色 染色过程简单 与EB一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗 对DNA和RNA的迁移影响极小 对核酸迁移的影响小于SYBR Green I 与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容 使用312nm激发的UV凝胶成像系统时,GelRed可以完美的替代EB;使用254nm激发的UV凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时,GelGreen足以替代任意一种SYBR染料(见图4中的光谱图) 图 1. 在37 C下,分别使用1X SYBR Green I, SYBR Safe, GelRed and GelGreen 对HeLa 细胞进行孵化,并分别在5分钟(A)和30分钟(B)后观察。实验显示SYBR染料迅速进入细胞并将细胞内的核酸染成亮绿色(以上仅图示 SYBR Green 1),而 GelRed 和 GelGreen 则因为不能穿透细胞膜而完全没有进入细胞内, 足以证明GelRed和GelGreen是安全的。 要想让DNA染色剂安全,唯一的办法就是设法不让其穿透细胞膜进入活体细胞内,Biotium 做到了! 图 4. GelGreen (绿色) GelRed (红色)在 PBS 缓冲溶液中结合 dsDNA 后的激发和发射光谱。 图 5. 室温下, GelRedTM( 500 nm )和 SYBR Gold ( 488 nm )稀释在 1 TBE 凝胶染色液中测得的吸光度随时间变化图。 GelRed 和 SYBR Gold 初始的吸光度值分别为 0.029 和 0.051 。 目前大多数商业化的核酸染料(凝胶染色试剂)总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不完全令人满意。例如,虽然 EB (溴化乙啶)作为目前使用最广泛的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质。而且EB染色后具有较高的背景荧光信号(如图1)。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。 SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料 ,但它的染色效果还远不及 SYBR Green I 。 至于国内有公司宣称的新产品Goldview,我们不想多加评论。因为从极为相似的对比试验结果来看,该产品似乎就是AO(丫啶橙 ,一种剧毒产品,且荧光亮度不佳)。请看Goldview 与 AO 对比试验结果(其中Goldview是从国内某公司采购,AO则来自SIGMA,报告来自开放生物) Biotium公司的GelRed 和 GelGreen 无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色,都表现出了极高的灵敏度。为配合 312 nm UV 凝胶成像系统而设计的 GelRed ,在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后(该试验步骤中使用稀释的 NaCl 溶液替代传统的 TBE 缓冲溶液),在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold 。但与 SYBR Gold 不同, GelRed 在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度,事实上GelRed 在检测低浓度、微量 DNA 方面比 EB 表现出更高的灵敏度,尤其对小分子量的 DNA 检测非常灵敏(图1)。 GelGreen 可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。 GelGreen 无论是在预制凝胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当,但不存在后者的不稳定性问题。实际上, GelRed 和 GelGreen ,特别是 GelRed 非常稳定,可以长期在室温下保存。当这两种染料稀释在 TBE 或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热,便于采用常规方法制备预制凝胶。含有染料的预制凝胶可以成批制备,长期保存。 同样重要的是, GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。 独立的测试服务公司( Litron Laboratories, Inc. )进行的标准艾姆斯氏测试结果表明, 在 18.5 g /mL (该浓度远高于推荐用于电泳后染色的 约 4 g/mL 的 3X 染色液 )浓度下, GelGreen 没有诱变性,而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞,正是这一特性降低了染料的细胞毒性。如图3。相反, SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色,这正是由于它能快速的被细胞吞入。由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用( Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001) ),因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。 Table A. 订货信息 凡是市场上声称具有与Gelred和Gelgreen相同特性的 EB 替代品,且不指明是 Biotium 公司品牌的核酸染料,经检验都是通过Gelred或 Gelgreen稀释后重新包装的水货,染色质量远不及Biotium原包装产品。我们鄙视这种损害客户利益的行为,并坚决打击,发现一次我们将不再向其供货! 在此,我们呼吁用户在购买Biotium公司产品时, 请选择开放生物--Biotium中国总代理(OPE)及其授权经销商(官方网站验证)。 上海开放生物科技有限公司 沪公网安备 31010402002419号网站备案号:沪ICP备09052460号上海市徐汇区虹漕路39号D5座3楼Biotium 中国区总代理-上海开放生物科技有限公司,专利产品和技术:CF染料新一代荧光标记染料,EvaGreen高分辨率溶解曲线饱和染料,NucView双功能荧光凋亡检测Caspase3/7,Cheetah热启动酶用于多重PCR技术和SNP检测、突变扫描等,AllGlo探针合成染料(替代Taqman技术),细胞凋亡、活性检测试剂盒。DNA定量试剂盒、蛋白定量试剂盒、核酸安全无毒灵敏染料GelRed、蛋白快速染色、神经、离子指示探针等等。